文章來源：藥靶孺子牛
高尿酸血癥是痛風(fēng)的重要病理基礎(chǔ)，是代謝綜合征和心血管、慢性腎病的危險(xiǎn)因素，但目前缺乏安全有效的治療方法。牡丹葉具有多種生物活性成分，如類黃酮、單萜、單寧和酚酸，在一項(xiàng)臨床研究中牡丹葉被報(bào)道能有效降低血清尿酸水平并緩解痛風(fēng)，但其物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制尚不明確。
2023年7月11日，西北大學(xué)生命科學(xué)院王四旺，西安市中醫(yī)院安軍明團(tuán)隊(duì)在Phytomedicine發(fā)表題為“Paeonia × suffruticosa Andrews leaf extract and its main component apigenin 7-O-glucoside ameliorate hyperuricemia by inhibiting xanthine oxidase activity and regulating renal urate transporters”的文章，揭示芹菜素7-O-葡萄糖苷（AG）是牡丹葉提取物治療高尿酸血癥小鼠的主要降尿酸活性成分。它抑制肝臟黃嘌呤氧化酶活性以減少尿酸合成，并調(diào)節(jié)腎尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白以刺激尿酸排泄，減輕高尿酸血癥引起的腎臟損傷。
1、牡丹葉的活性成分提取分離
通過外標(biāo)法和吸收光譜圖分析，從牡丹葉水提物中共鑒定出6種化合物，3種單萜苷（GA、MG、OPF），2種酚酸（PF、GPF），1種黃酮（AG），通過HPLC對6種化合物的含量進(jìn)行了定量分析（圖1）。
圖1 牡丹葉的活性成分提取分離
2、?牡丹葉提取物減輕高嘌呤飲食誘導(dǎo)的小鼠高尿酸血癥
通過高尿酸血癥小鼠模型，作者研究了牡丹參葉的降尿酸作用。結(jié)果顯示牡丹葉提取物降低血清尿酸水平和XOD活性，此外，檢測血肌酐和尿素氮評價(jià)高尿酸血癥小鼠的腎功能，發(fā)現(xiàn)牡丹葉提取物減輕了高尿酸血癥小鼠的腎功能損害（圖2）。
圖2 牡丹葉提取物減輕高嘌呤飲食誘導(dǎo)的小鼠高尿酸血癥
3、芹菜素7- o –葡萄糖苷是牡丹葉提取物治療高尿酸血癥的主要活性成分
通過建立高尿酸血癥模型，研究牡丹葉鑒定的6種成分（GA、MG、OPF、PF、GPF、AG）的降尿酸作用。結(jié)果顯示牡丹葉和6種成分降低了血清尿酸水平，改善了血清肌酐水平，其中芹菜素7- o -葡萄糖苷（AG）同時改善血清SOD和MDA水平，且牡丹葉和AG的治療改善了異常器官系數(shù)，結(jié)果表明牡丹葉中的AG在治療中發(fā)揮重要作用（圖3）。
圖3 芹菜素7- o -葡萄糖苷是牡丹葉提取物治療高尿酸血癥的主要活性成分
4、?芹菜素7- o –葡萄糖苷可改善高尿酸血癥小鼠的尿酸水平
為進(jìn)一步探AG的降尿酸作用，給予不同濃度的AG（AG-L、AG-M、AG-H），發(fā)現(xiàn)AG呈劑量依賴性降低血清尿酸含量，加速尿酸排泄（圖4）。
圖4?芹菜素7- o -葡萄糖苷可改善高尿酸血癥小鼠的尿酸水平
5、AG對體內(nèi)外XOD活性的影響
XOD是驅(qū)動尿酸合成的主要酶，作者檢測了AG是否抑制了高尿酸血癥小鼠的XOD活性。體外酶活性分析顯示AG抑制XOD活性，且AG治療后血清和肝臟中的XOD含量降低。分子對接顯示AG與XOD直接結(jié)合，表明AG是一種潛在的XOD抑制劑（圖5）。
圖5AG對體內(nèi)外XOD活性的影響
6、芹菜素7- o –葡萄糖苷通過調(diào)節(jié)尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體促進(jìn)尿酸排泄
腎臟尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白主要負(fù)責(zé)尿酸的排泄。作者WB發(fā)現(xiàn)AG組的大鼠腎組織中重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白URAT1和GLUT9蛋白表達(dá)低于高尿酸血癥組，而分泌轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白OAT1和ABCG2表達(dá)增加（圖6）。
圖6 WB檢測AG調(diào)節(jié)不同的尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
免疫熒光分析進(jìn)一步驗(yàn)證了AG在調(diào)節(jié)尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用，結(jié)果表明，AG通過調(diào)節(jié)不同的尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白來促進(jìn)尿酸的排泄（圖7）。
圖7 免疫熒光檢測AG調(diào)節(jié)不同的尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白
7、芹菜素7- o –葡萄糖苷可減輕高尿酸血癥小鼠的氧化應(yīng)激
高尿酸血癥的發(fā)病機(jī)制與氧化應(yīng)激密切相關(guān)。作者發(fā)現(xiàn)牡丹葉改善了氧化應(yīng)激標(biāo)記物，如血清SOD和MDA。此外，在高尿酸血癥小鼠中，AG同樣減輕了腎臟的氧化應(yīng)激（圖8）。
圖8 芹菜素7- o -葡萄糖苷可減輕高尿酸血癥小鼠的氧化應(yīng)激
8、芹菜素7- o –葡萄糖苷減輕高尿酸血癥小鼠的腎臟損傷
高尿酸血癥的進(jìn)展常伴有腎臟損害。作者觀察了AG對高尿酸血癥小鼠的腎臟保護(hù)作用。結(jié)果顯示，經(jīng)AG治療后，腎臟表面光滑，呈紅褐色，腎臟系數(shù)低于高尿酸血癥組。此外，AG組的血肌酐和血尿素氮水平均低于高尿酸血癥組，AG組的尿肌酐和血尿素氮水平明顯高于高尿酸血癥組。HE染色顯示AG改善高尿酸血癥小鼠的組織病理損傷（圖9）。
圖9 芹菜素7- o -葡萄糖苷減輕高尿酸血癥小鼠的腎臟損傷
總結(jié)
研究從驗(yàn)證牡丹葉的降尿酸作用入手，明確了牡丹葉治療高尿酸血癥小鼠的主要活性成分為AG，其作用機(jī)制與抑制XOD活性、調(diào)節(jié)尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體、改善氧化應(yīng)激有關(guān)。具體來說，AG抑制肝臟黃嘌呤氧化酶活性以減少尿酸合成，并調(diào)節(jié)腎尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白以刺激尿酸排泄，減輕高尿酸血癥引起的腎臟損傷（圖10）。研究為牡丹葉開發(fā)為治療高尿酸血癥的新型藥物奠定了基礎(chǔ)。
圖10?牡丹葉提取物及其活性成分改善高尿酸血癥
